Meio Separação Linfócitos 100ml LSM ref.: 25-072-CI Corning
Descrição
Meio Separação Linfócitos 100ml LSM ref.: 25-072-CI Corning
O meio de separação de linfócitos (LSM) foi originalmente projetado para o isolamento in vitro de linfócitos de sangue total diluído.
É uma solução iso-osmótica estéril de polissacarose e diatrizoato com baixa viscosidade e densidade de 1,077-1,080 g / mL a 20ºC.
Certificado completo de análise disponível para cada registro de produção, juntamente com informações completas de formulação
Produzido sob os mais altos padrões da indústria para garantir resultados superiores.
Introdução
O Meio de Separação de Linfócitos da Corning (LSM) é uma polissacarose iso-osmótica estéril e solução de diatrizoatoção com baixa viscosidade originalmente projetada para o isolamento in vitro de linfócitos de todo diluído
sangue.
LSM é uma solução filtrada estéril contendo 96,22 gm / L de ácido diatrizóico e 61,36 gm / L de polisucrose 400 a uma densidade de 1,077-1,080 gm / mL.
A solução tem uma osmolalidade de 290 ± 20 mOsm e um pH de 7,5 ± 1,5. O hidróxido de sódio é adicionado conforme necessário para ajustar o pH.
Princípio do Procedimento
O LSM é baseado no método adaptado de isolamento de linfócitos usando técnicas de centrifugação de Boyum em que sangue desfibrinado diluído é colocado em camadas em uma solução de metrizoato de sódio e dextrano ou poli
sacarose e centrifugado em baixas velocidades por 30 minutos.
Migração diferencial após centrifugação resultará na formação de várias camadas de células.
Células mononucleares (linfócitos e monócitos) e as plaquetas estarão contidas na interfase plasma-LSM com faixas devido à sua densidade.
A pelota que é formado contém principalmente eritrócitos e granulócitos, que migraram através do gradiente para o fundo do tubo.
Os linfócitos são recuperados aspirando a camada de plasma e, em seguida, removendo o células.
O excesso de plaquetas, LSM e plasma podem ser removidos por lavagem celular.
Instruções de uso
O LSM é projetado para o isolamento simples e rápido de linfócitos do sangue total que foi diluído e tratado com anticoagulante ou agente desfibrinante.
Nota: Para melhores resultados, use sangue colhido menos de 2 horas antes.
Não use sangue que foi coletado mais de 24 horas antes do uso
Etapa 1: LSM deve estar em temperatura ambiente.
Misture bem o LSM invertendo o frasco suavemente.
Etapa 2: transferir assepticamente 3 mL de LSM para um tubo de centrífuga de 15 mL.
Passo 3: Misture 2 mL de sangue desfibrinado ou heparinizado com 2 mL de PBS ou solução salina balanceada.
Etapa 4: Camada de sangue diluído com cuidado na parte superior do LSM, criando uma interfase sangue-LSM nítida.
Não misture. A qualidade da separação depende de uma interfase entre as linfócitos e a solução.
Etapa 5: Centrifugue o tubo a 400 x g em temperatura ambiente por 15 a 30 minutos.
A centrifugação deve sedimentar eritrócitos e leucócitos polinucleares e bandas de linfócitos mononucleares acima o LSM conforme mostrado na Figura 1.
Etapa 6: Aspire a camada superior de plasma transparente 2-3 mm acima da camada de linfócitos e descarte.
Etapa 7: Aspire a camada de linfócitos e dilua com solução salina equilibrada tamponada (~ 3 volumes) em um novo tubo de centrifugação e centrifugue por 10 minutos em temperatura ambiente em uma velocidade suficiente para sedimentar as células sem danos, por exemplo, 160-260 x g.
Lavar as células remove o LSM e reduz a porcentagem de plaquetas.
Etapa 8: Lave as células novamente com solução salina equilibrada tamponada e ressuspenda na solução apropriada meio para suas aplicações
Marca
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Corning
